编号:DS-0001

产品名称:

Polymer双染检测试剂盒(Mo/HRP+Rb/AP)

¥2,500.00


详细信息:
规  格:6ml
试剂盒内容:
试 剂名 称规 格
试剂1辣根酶标记山羊抗小鼠IgG聚合物3ml
试剂2碱磷酶标记山羊抗兔IgG聚合物3ml
试剂3ADAB稀释液(即用型)6ml
试剂3BDAB浓缩液(20×)0.5ml
试剂4AGBI—久红底物液(即用型)15ml
试剂4BGBI—久红活化剂(5×)3ml
试剂4CGBI—久红色素底物(100×)150μl
试剂5Simpo—Mount封片剂6ml
标本染色:1. 固定:为确保能够获得高质量和可重复性的染色结果,使用者必须提供经恰当固定和制备的组织切片。
2. 组织需使用经过防脱片处理的载玻片以防染色过程中脱落。
3. 石蜡包埋的组织切片需经过二甲苯脱蜡和逐级酒精脱水。
4. 细胞涂片需要尽可能为单层细胞,以期获得满意结果。
5. 三种对照片可对实验结果的解读有所帮助:阳性对照、试剂对照(使用同种型对照试剂)和阴性对照。
6. 免疫组化染色:从此步骤开始,不要让切片干片。
7. 将切片放置于辣根酶和碱磷酶阻断液(推荐使用Klear Dual Enzyme Block E36)中孵育10分钟,蒸馏水冲洗至少两次。
8. 根据厂家所提供的一抗修复方式对组织切片进行修复,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。
9. 封闭(可选择):对于石蜡切片,此步骤可改善染色结果;对于冰冻切片,可视固定方式酌情取舍。
10. 加入足够量的两种一抗混合物于切片上,湿盒中孵育,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。注意:使用者必须在进行双染之前确定合适的一抗稀释度和孵育时间。
11. 将两种二抗按照所需要的量等比例混合,充分混匀,每张切片加入50-100μl混合二抗,湿盒中孵育30分钟,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。
12. DAB染色:临用前制备DAB工作液,在1ml试剂3A(DAB稀释液)中,加入约50μl试剂3B(DAB浓缩液),混合均匀,即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配,配好后避光保存,7小时内用完。滴加足以覆盖组织的上述DAB工作液,镜下观察显色情况,约需要5分钟。蒸馏水冲洗以终止反应,TBS-T冲洗,2分钟×3次
13. GBI-久红染色:在1ml的试剂4A(GBI—久红底物液)中加入200μl的试剂4B(GBI—久红活化剂,注意使用前摇匀),混匀,再加入10μl的试剂4C(GBI—久红色素底物)于上述混合液中,再次混匀。如果一次使用量不多,也可按照上述比例配制合适量的显色液。在每张切片上加入50-100μl或足以覆盖组织的上述工作液,孵育10分钟,镜下观察显色情况。为增强染色效果,可再次新鲜配制上述液体,并重复上述过程。蒸馏水冲洗终止显色。注意:新鲜配制后立即使用,配制过程中注意将4B溶液摇匀后使用
14. 苏木素复染:复染数秒,不要过染。自来水冲洗2-3分钟。放入PBS中返蓝(约0.5-1分钟),去离子水冲洗。
15. 封片:滴加足够量的试剂5(Simpo-Mount封片剂)覆盖组织,轻轻旋转切片使封片剂均匀平铺覆盖组织,不要加盖玻片。
16. 水平放置切片,40-50℃烤箱中至少30分钟或者室温水平放置直到完全变干,变硬的封片剂是一种保护屏障防止有机溶剂侵蚀显色剂。
注意事项:1. 固定方式和时间、组织切片厚度、抗原修复方式、一抗稀释度和孵育时间等方面的因素都会对结果产生影响,在对实验结果进行分析时使用者应该充分考虑上述因素。
2. 假如需要加盖盖玻片,将已覆盖上述变硬的封片剂的切片置于二甲苯中并立即取出,滴加中性树胶,盖上盖玻片即可。
3. GBI-久红不溶于有机溶剂,也可以用盖玻片,但是脱水步骤必须短暂,以便信号不脱失。建议:
a) 80%酒精,20秒,一次
b) 95%酒精,20秒,一次
c) 100%酒精,20秒,三次
d) 100%二甲苯,20秒,1次
e) 加一滴二甲苯基质的封片剂(建议使用GBI的O-Mount E02-18)并封片。注意轻压以便排除气泡。
4. DAB可能是致癌物质,请采取必要的防护措施。
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