编号:DS-0002

产品名称:

Polymer双染检测试剂盒(Mo/HRP+Rb/AP)

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详细信息:
分类:检测系统
子分类:DS双染试剂盒
规格:12ml
主要成分:试剂1 辣根酶标记山羊抗小鼠IgG聚合物
试剂2 碱磷酶标记山羊抗兔IgG聚合物
试剂3A DAB稀释液(即用型)
试剂3B DAB浓缩液(20×)
试剂4A GBI—久红底物液(即用型)
试剂4B GBI—久红活化剂(5×)
试剂4C GBI—久红色素底物(100×)
试剂5 Simpo—Mount封片剂
检验方法:1. 固定:为确保能够获得高质量和可重复性的染色结果,使用者必须提供经恰当固定和制备的组织切片。
2. 组织需使用经过防脱片处理的载玻片以防染色过程中脱落。
3. 石蜡包埋的组织切片需经过二甲苯脱蜡和逐级酒精脱水。
4. 细胞涂片需要尽可能为单层细胞,以期获得满意结果。
5. 三种对照片可对实验结果的解读有所帮助:阳性对照、试剂对照(使用同种型对照试剂)和阴性对照。
6. 免疫组化染色:从此步骤开始,不要让切片干片。
7. 将切片放置于辣根酶和碱磷酶阻断液(推荐使用Klear Dual Enzyme Block E36)中孵育10分钟,蒸馏水冲洗至少两次。
8. 根据厂家所提供的一抗修复方式对组织切片进行修复,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。
9. 封闭(可选择):对于石蜡切片,此步骤可改善染色结果;对于冰冻切片,可视固定方式酌情取舍。
10. 加入足够量的两种一抗混合物于切片上,湿盒中孵育,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。注意:使用者必须在进行双染之前确定合适的一抗稀释度和孵育时间。
11. 将两种二抗按照所需要的量等比例混合,充分混匀,每张切片加入50-100μl混合二抗,湿盒中孵育30分钟,PBS(含0.05% Tween 20)或TBS-T冲洗,2分钟×3次。
12. DAB染色:临用前制备DAB工作液,在1ml试剂3A(DAB稀释液)中,加入约50μl试剂3B(DAB浓缩液),混合均匀,即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配,配好后避光保存,7小时内用完。滴加足以覆盖组织的上述DAB工作液,镜下观察显色情况,约需要5分钟。蒸馏水冲洗以终止反应,TBS-T冲洗,2分钟×3次
13. GBI-久红染色:在1ml的试剂4A(GBI—久红底物液)中加入200μl的试剂4B(GBI—久红活化剂,注意使用前摇匀),混匀,再加入10μl的试剂4C(GBI—久红色素底物)于上述混合液中,再次混匀。如果一次使用量不多,也可按照上述比例配制合适量的显色液。在每张切片上加入50-100μl或足以覆盖组织的上述工作液,孵育10分钟,镜下观察显色情况。为增强染色效果,可再次新鲜配制上述液体,并重复上述过程。蒸馏水冲洗终止显色。注意:新鲜配制后立即使用,配制过程中注意将4B溶液摇匀后使用
14. 苏木素复染:复染数秒,不要过染。自来水冲洗2-3分钟。放入PBS中返蓝(约0.5-1分钟),去离子水冲洗。
15. 封片:滴加足够量的试剂5(Simpo-Mount封片剂)覆盖组织,轻轻旋转切片使封片剂均匀平铺覆盖组织,不要加盖玻片。
16. 水平放置切片,40-50℃烤箱中至少30分钟或者室温水平放置直到完全变干,变硬的封片剂是一种保护屏障防止有机溶剂侵蚀显色剂。
预期用途:双染技术是目前最常应用的免疫组化方法之一,由于可以在一张切片上同时显示两种不同的抗原,为病理诊断和科研提供了更加直观和详实的依据。本试剂盒特点是灵敏度高、操作简单(只需要4步)、无内源性生物素干扰、结果对比度强、易于观察。
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