编号:SPN-9002

产品名称:

小鼠SPN试剂盒

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详细信息:
分类:检测系统
子分类:生物素法检测系统
主要成分:
试剂1:封闭用正常山羊血清浓缩液
试剂2:生物素标记山羊抗鼠IgG聚合物浓缩液
试剂3:辣根酶标记链霉卵白素浓缩液
检验方法:检验所需仪器、设备:移液器、恒温箱、修复仪、免疫组化笔、计时器、孵育盒、染色架、盖玻片、光学显微镜、洗瓶。
2、试剂准备:内源性过氧化物酶阻断剂与DAB显色液需要在使用前配制。
3、操作程序:
a) 脱蜡和水化
石蜡切片置于新鲜二甲苯中,浸泡10分钟×3次;去除多余的液体后,置于无水乙醇中,浸泡3分钟×3次;去除多余的液体后,置于95%乙醇中,浸泡3分钟×2次;去除多余的液体后,置于75%乙醇中,浸泡3分钟×2次;蒸馏水冲洗1分钟,置于PBS缓冲液中。
b) 抗原修复,参见一抗说明书。
c) 阻断内源性过氧化物酶
加入适量的内源性过氧化物酶阻断剂,室温孵育10分钟;PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
d) 滴加封闭用正常山羊血清工作液
正常山羊血清工作液配制:正常山羊血清浓缩液使用0.01M PBS按1:9比例稀释,稀释后山羊血清浓度为10%。
滴加100μL或适量的封闭用正常山羊血清工作液,室温孵育10~15分钟,倾去血清,勿洗。
e) 滴加一抗
根据组织大小,滴加100μL或适量的一抗,37℃孵育60分钟;PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
f) 滴加生物素标记山羊抗鼠IgG聚合物工作液
生物素标记山羊抗鼠IgG聚合物工作液配制:生物素标记聚合物浓缩液使用0.01M PBS稀释,稀释比例1:100。
滴加100μL或适量的稀释生物素标记山羊抗鼠IgG聚合物,37℃孵育10~15分钟;PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
g) 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液
辣根酶标记链霉卵白素工作液配制:辣根酶标记链霉卵白素浓缩液使用0.01M PBS稀释,稀释比例1:100。
滴加100μL或适量的辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃孵育10~15分钟;PBS缓冲液冲洗3分钟×3次。
h) 显色
加入适量新鲜配制的DAB或AEC显色液,室温孵育5~8分钟。
i) 复染
自来水冲洗,苏木素染色液孵育20秒;分化、冲洗返蓝。
j) 脱水、透明、封片
k) 阅片。
4、结果判定,染色结果须由有资质的病理医生对染色后的组织片在光学显微镜下观察并进行判读。
预期用途:主要用于一抗种属来源于小鼠的免疫组织化学染色的显色。
储存/效期:2~8℃避光保存,不得冻存;产品有效期为12个月。
使用时即拿即放,使用后应立即放回冰箱,开封后试剂有效期6个月。
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