编号:ZK-7500

产品名称:

人外周血T细胞亚群SAP法检测试剂盒

¥1,400.00


详细信息:
规  格:100人份
试剂盒内容:
1防脱片剂2ml
2固定液10ml
3A小鼠抗人CD3单抗1ml
B小鼠抗人CD4单抗1ml
C小鼠抗人CD8单抗1ml
4生物素标记羊抗小鼠IgG( IgG/Bio)1.5ml × 2
5碱性磷酸酶标记链霉卵白素(S-A/AP)1.5ml × 2
6A底物增强剂( 40×)200μl
B底物液( 40× )200μl
C底物缓冲液( 10× )800μl
7细胞核复染液5ml
8封片剂1ml
9记号笔1支
10PBS2包(1000ml)
标本染色:1. 充分干燥(室温2小时以上或过夜)的细胞涂片先用记号笔在标本外画圈,然后滴加固定液50μl,室温静置2-3分钟,用PBS淋洗,擦干玻片背面及细胞外的PBS。
*以下反应均需在湿盒中进行。
2. 分别滴加抗人CD3、CD4、CD8单抗适量(10-30μl), 4℃过夜,PBS淋洗3次。
3. 滴加生物素标记抗小鼠IgG适量(10-30μl),37℃孵育30-45分钟,PBS淋洗3次。
4. 滴加碱性磷酸酶标记链霉卵白素适量(10-30μl)37℃孵育30-45分钟,PBS淋洗3次。
5. 滴加显色剂30-50μl,室温显色20-40分钟。可在显微镜下观察,待细胞膜上出现红色标记物时,用PBS淋洗。
6. 滴加细胞核复染液30-50μl,30秒后自来水淋洗。
7. 滴加封片剂,盖片封片,镜检。如不需保存亦可用水替代封片剂盖片镜检。
标本制备:取肝素抗凝(25μl/ml)的静脉血1~2ml,PBS稀释1-2倍后,沿装有等量淋巴细胞分离液的试管壁混匀缓慢加至液面上层,保持两种液体界面清晰,离心(2000转/分)15-20分钟,吸取两液面交界处的单个核细胞层,加5倍PBS,离心(1000转/分)5分钟,弃上清液,沉淀即为单个核细胞。利用试管中剩余的少许回流液体(约一滴)混匀细胞,制成单个核细胞悬液。滴30μl细胞悬液于载玻片上,静置2分钟使细胞下沉粘附于玻片上,吸去液体,快速吹干或37℃温箱1小时烤干。或用PBS将单个核细胞调至2×105个/ml,离心涂片机1000转离心1-2分钟制片,快速吹干或37℃温箱1小时烤干。涂片前取防脱片剂5-10μl均匀推片,亦可用棉签粘取防脱片剂均匀涂于干净玻片上,待干后制备细胞涂片,以防掉片。
观  察:高倍镜下选取染色好的视野记数100-200个单个核细胞,细胞表面有红色标记物为阳性细胞。算出阳性率。
正常参考值:正常人外周血中,阳性细胞百分率一般在:CD3,60-80%;CD4,35-55%;CD8,20-30%;CD4/CD8的比值在1.5-2.0范围内。
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