【断据】2016年NordiQC B22轮Ki67测评简介（UltraMAB抗体UMAB107喜获推荐）

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2016-12-16 中杉金桥

在刚刚结束的NordiQC乳腺癌Ki67测评中，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供的高敏感和特异性的自主研发品牌抗体Ki67（克隆号：UMAB107）取得了优异的成绩，并最终被NordiQC作为优秀抗体进行了推荐。

此次测评所使用的标本除了三个细胞标本（不参与评分）外，还包括：

No.	材料	Ki67 proliferation index
1.	胰腺	< 1% 外分泌腺及导管上皮细胞
5.	肝脏	< 1% 肝细胞
6.	扁桃体	80-90%生发中心B细胞
7.	乳腺导管癌	20-30%
8.	乳腺导管癌	70-80%
9.	乳腺导管癌	5-10%

优片评定标准如下：

• 80-90%生发中心B细胞（明区和暗区）和绝大多数的基底上层鳞状上皮细胞呈现中等至强的异质性细胞核染色；
• 胰腺外分泌腺和大的导管散在的上皮细胞呈现中等至强的异质性细胞核染色；
• 在三个乳腺癌标本中呈现与所示ki67增值指数相符的中等至强的异质性细胞核染色；
• 仅有小于1%的散在的肝细胞核染色；
• 所有标本无或仅有很微弱的背景和细胞质染色。

有409家实验室参加了本次测评，93%取得了优良的成绩。最常见导致染色不佳的原因包括：不适当的抗原热修复；一抗浓度过低。同以往的Ki67测试相同，不佳的染色主要表现在太弱或假阴性，造成Ki67增殖指数（PI）下降。实际上所有的实验室均可以证明像暗区生发中心B细胞这样Ki67高表达的细胞，但是位于明区Ki67低表达细胞才是校准实验步骤的最佳依据，对于这些明区B细胞的弱染色或假阴性染色可以直接影响到对于乳腺癌Ki-67增值指数的结果。有78%的不合格染色存在上述问题。另外，其它不合格的染色还包括伴背景染色的弱阳性、形态受损或过度复染。

本次测试一共有150家实验室使用浓缩型抗体。已被证实具有良好特性的小鼠单抗MIB-1和兔单抗SP6依然是最为广泛使用的抗体，也取得了良好的染色结果，但是新近问世的小鼠单抗BS4、GM001、K2和UMAB107亦可提供优质的染色结果。除外抗体因素，有效的抗原热修复和对一抗的仔细校准是获得良好结果的关键所在。检测系统的选择所占的权重并不重要，无论是二步法还是三步法聚合物检测系统在一抗调整合适的基础上均可获得满意的结果。

对于最为常用的小鼠单抗MIB-1，在来自Dako、Leica和Ventana的三大染色平台上均可以获得优秀的成绩。但是原因不明的是，MIB-1在Leica的Bond免疫组化平台上较之其它两个平台结果逊色，尽管使用了灵敏的三步聚合物检测系统，仅有31%的实验室获得了“优秀”的成绩，甚至有19%的实验室被评为不合格。与之相对应的是，在Dako免疫组化检测平台中上述两组数据分别对应的是80%和0%。从上传提交的步骤上并不能给出出现这种差异的理由。

从本次测评并结合以往的Ki67测试来看，阑尾被推荐用于作为Ki67检测的阳性和阴性对照，生发中心暗区几乎所有的B细胞都必须为中等至强的细胞核染色，而明区的多数B细胞亦应至少呈现弱至中等强度的细胞核染色，在套区B细胞绝大多数无染色。肝脏和胰腺可以作为补充性阴性对照，小于1%的肝细胞和胰腺外分泌腺上皮细胞应为阳性（感染性和反应性条件下可以产生Ki67增殖指数的升高，白细胞也可不明原因地出现微弱的细胞核染色反应）。以上推荐与国际专家特设委员会已发表的指南中所推荐的对照一致。

总之，小鼠单抗BS4、GM001、K2、MIB-1、UMAB107和兔单抗30-9、SP6均被推荐用于Ki67的检测，有效的抗原热修复是必需的，同时在敏感性和形态的完好性之间要达到很好的平衡。

图1 Ki67在扁桃体中的正确表达

图2 Ki-67在胰腺中的正确表达

UltraMAB技术

UltraMAB技术是美国Origene集团公司独家拥有的保证抗体高特异性和灵敏度技术。Origene公司拥有全球最大的cDNA克隆文库，利用哺乳动物表达系统，已成功克隆出近2万个最接近天然活性的人类已知功能蛋白，这就从根本上保证了生产抗体的最高敏感度。同时，Origene公司又把所有蛋白制作成蛋白芯片，用来检测生产抗体的特异性。因此，UltraMAB技术可以保证生产抗体最高的灵敏度和特异性。